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英文缩写 Bacmid

英文全称 Baculovirus plasmid中文解释 杆状病毒质粒 [带有杆状病毒基因组的质粒，可在细菌和昆虫细胞之间穿梭]

缩写分类 生物科学

提取

Baculovirus plasmid简易提取方法：

挑白斑摇菌8h左右（一般会过夜摇），取2ml菌液，12000rpm ，30s，弃上清即可

1．溶液I—溶菌液：（加 300ul 将离心完的菌液混匀）

溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。

葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。

EDTA：（1）螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用（DNase作用时需要一定的金属离子作辅基）;（2）EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。

2．溶液II－NaOH－SDS液(加300ul ，裂解5min，轻柔混匀，最好不要拿枪吹，上下颠倒混匀就行)：NaOH：核酸在pH大于5，小于9的溶液中，是稳定的。但当pH＞12或pH＜3时，就会引起双链之间氢键的解离而变性。在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1／L，加抽提液时，该系统的pH就高达12.6，因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。

SDS（2%）：SDS是离子型表面活性剂。它主要功能有：（1）溶解细胞膜上的脂质与蛋白，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。（2）解聚细胞中的核蛋白。（3）SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R＋-蛋白质的复合物，使蛋白质变性而沉淀下来。但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取过程中，必须把它去除干净，防止在下一步操作中（用RNase去除RNA时）受到干扰。

3. 溶液III--3mol／L NaAc（pH4.8）溶液（主要是沉淀蛋白的，加后轻柔混匀，冰上放置15min）： NaAc的水溶液呈碱性，为了调节pH至4.8，必须加入大量的冰醋酸。所以该溶液实际上是NaAc-HAc的缓冲液。用pH4.8的NaAc溶液是为了把pH12.6的抽提液，调回pH至中性，使变性的质粒DNA能够复性，并能稳定存在。而高盐的3mol／L NaAc有利于变性的大分子染色体DNA、RNA以及SDS-蛋白复合物凝聚而沉淀之。前者是因为中和核酸上的电荷，减少相斥力而互相聚合，后者是因为钠盐与SDS－蛋白复合物作用后，能形成较小的钠盐形式复合物，使沉淀更完全。

4.将冰上放置的混合液12000rpm，10min离心，取上清加异丙醇（1：1），然后冰上放20min左右，再12000rpm离心10min

5.弃上清，加预冷的75%乙醇1ml洗一下（加完后应该能看到在EP管底部有一小块白色的沉淀）

6.然后弃乙醇，留下白色沉淀（如果沉淀飘起，可以再12000rpm离心），凉干，加50ul左右TE或双蒸水

溶解片刻即可。（一般情况下应该有80-100ng/ul）