| 词条 | 猿猴空泡病毒 |
| 释义 | 猿猴空泡病毒40(Simian vacuolating virus 40, SV40)是迄今为止研究得最为详尽的乳多空病毒(Papova viruses)之一。SV40病毒的基因组是一种环形双链的DNA，其大小仅有5243bp，很适于基因操作。 猿猴空泡病毒-概况猿猴空泡病毒40（SV40），是60年代初发现分离的猴肾细胞病毒，它是一种DNA病毒，其在体外可使人及动物多种组织类型正常细胞发生恶性转化，在转基因小鼠体内可诱发多种肿瘤形成，并且人类许多肿瘤的发生也与之有关。近年来，人们对SV40与人类肿瘤的关系进行了大量的研究。本实验室建立的SV40转基因小鼠肿瘤模型多发胰腺癌，为进一步研究SV40与肿瘤发生的关系，为人们研究癌症的病因、发病机理以及治疗提供有力的工具打下坚实的基础。 本文通过抽提COS-1细胞总RNA作为模板，根据GenBank中SV40 T基因序列设计一对引物，用RT-PCR技术扩增出921bp的SV40 T基因片段，克隆到pGEM-T easy载体中，经测序后，再亚克隆到pGEX-6p-1谷光甘肽-S-转移酶（GST）基因的下游，获得的重组质粒转化大肠杆菌BL_（21），用IPTG诱导SV40T基因片段的表达，经SDS-PAGE电泳及western-blotting分析，GST-S融合蛋白的分子质量为53kDa。用该表达产物免疫新西兰大白兔，所制备的抗血清经间接免疫荧光实验（IFA）显示可与COS-1细胞发生特异性反应。 猿猴空泡病毒-生命周期根据SV40病毒感染作用的不同效应，可将其寄主细胞分成三种不同的类型。SV40病毒在感染了CV-1和AGMK猿猴细胞之后，便产生感染性的病毒颗粒，并使寄主细胞裂解。我们称这种感染效应为裂解感染（lytic infection），而猿猴细胞则叫做受纳细胞（permissive cell）。但如果感染的是啮齿动物（通常是仓鼠和小鼠）的细胞，就不会产生感染性颗粒，此时病毒基因组整合到寄生细胞的染色体上，于是细胞便被转化，也就是说发生了癌变。我们称这种啮齿动物细胞为SV40病毒的非受纳细胞（non-permissive cell） 。人体细胞是SV40的半受纳细胞（semi-permissive cell），因为同SV40病毒接触的人体细胞中，只有1%～2%会产生出感染性的病毒。 SV40病毒对猿猴细胞的裂解感染可分成三个不同的时相。在感染了寄主细胞之后，有一段长达8～12小时的潜伏期，在这个期间，病毒颗粒脱去蛋白质外壳，同时DNA逐渐地转移到寄主细胞核内；紧接着4小时为早期时相，此时发生早期mRNA和早期蛋白质的合成，并出现病毒诱导寄主细胞DNA合成的激发作用；在这以后的36小时称为晚期时相。进行病毒DNA、晚期mRNA和晚期蛋白质的合成，并在高潮时发生病毒颗粒组装。大约在感染的第三天，细胞裂解，平均每个细胞可释放出105个的病毒颗粒。 猿猴空泡病毒-基础分子生物学猿猴空泡病毒 SV40病毒是一种小型的20面体的蛋白质颗粒，由三种病毒外壳蛋白质Vp1、Vp2和Vp3构成，中间包装着一条环形的病毒基因组DNA。同其它病毒不同，SV40 DNA是同除了H1之外的所有寄主细胞组蛋白（H4、H2a、H2b和H3）相结合。这些组蛋白使病毒DNA分子紧缩成真核染色质所特有的念珠状核小体，这种结构特称为微型染色体（minichromosome）。感染之后的SV40基因组，输送到细胞核内进行转录和复制。SV40病毒基因组表达的时间顺序是相当严格的，据此可将其区分为早期表达区和晚期表达区。围绕在SV40 DNA复制起点周围约 400bp的 DNA区段，是十分引人注意的。例如，现在已经弄清紧挨这个起点的DNA序列，是调节早期和晚期初级转录本合成的控制信号。早期转录本的合成，就是由位于这个区段内的由一对72核苷酸序列串联而成的强化因子序列激活的。 SV40病毒基因组表达的一个重要特点是，它的RNA剪辑模式非常复杂。通过不同的剪辑途径，早期初级转录本加工成2种不同的早期mRNA（多瘤病毒的早期初级转录本加工成3种不同的早期mRNA）；而晚期的初级转录本加工成3种不同的晚期mRNA。 这2种早期mRNA分别编码大T抗原的小t抗原（即肿瘤蛋白质或抗原）。晚期转录本按照其特定的沉降系数，可区分为16S、18S和19S三种mRNA，它们分别编码Vp1、Vp3和Vp2病毒蛋白质。Vp1编码区同Vp2和Vp3的编码区是以不同的转译结构形式彼此交叠的。 SV40病毒编码的蛋白质 蛋白质 合成时间 功能 T抗原 早期 启动DNA复制 T抗原 早期 未知 VP1 晚期 主要的病毒外壳蛋白 VP2 晚期 次要的病毒外壳蛋白 VP3 晚期 次要的病毒外壳蛋白 猿猴空泡病毒-增强子序列在SV40病毒基因组中存在着一个增强子序列。其长度为72bp，以串联重复的形式位于基因组DNA复制起点的附近，它的主要功能是促进病毒DNA发生有效的早期转录，而且具有一般增强子所共有的基本特性。 外源的基因可以融合在SV40 DNA的早期转录区段内，而SV40的增强子又能够有效地激活SV40早期转录单位的转录活性。因此显而易见，SV40增强子在哺乳动物的基因操作中是相当有用的。此外，SV40增强子还可以增强由细胞启动子启动的基因转录作用。 |
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