概述

介绍

应用

概述

显微切割术(microdissection)是90年代初发展起来的一门新技术，它能够从组织切片或细胞涂片上的任一区域内切割下几百个、几十个同类细胞，甚至单个细胞，再进行有关的分子生物学方面的研究，如PCR，PCR－SSCP及比较基因组杂交等。

介绍

1，用于显微切割的组织切片可以是冰冻切片、石蜡包埋的组织切片或细胞涂片。切片的厚度可为4~10µm，冰冻切片需经甲醛或乙醇固定。

2，用于显微切割的组织切片还必须染色，以便于进行目标细胞群或单一细胞的定位。染色可以用普通方法，如1%~2%的甲基绿、0.1%的核固红、3.6%的瑞氏染液或2%的苏木素等，也可用免疫组织化学染色，如要切割霍奇金淋巴瘤组织切片上的R－S细胞时，可用CD15或CD30单克隆抗体染色进行靶细胞示踪。

3，显微切割的方法有手工操作法和激光捕获显微切割(laser capture microdissection ,LCM)技术，后者的基本原理是：将组织切片放在倒置显微镜的载物台上，并在切片表面覆盖一层乙烯乙酸乙烯酯(ethylene vinyl acetate ,EVA)薄膜。激光束从切片的上方垂直射下来，使其光路与显微镜聚光器的光路共轴，光斑正好落在显微镜视野中心，即要切割的区域。该区的EVA膜揭起来，与之相连的细胞也随之被完好地从切片上切割下来；将带有细胞的EVA膜放入试管内经蛋白酶消化使细胞与膜分开，同时也将细胞裂解，获得待提物质，如DNA，RNA或蛋白质等。

应用

显微切割术的特点是可从构成复杂的组织中获得某一特定的同类细胞或单个细胞，尤其适用于肿瘤的分子生物学研究，如肿瘤的克隆性分析，肿瘤发生和演进过程中各阶段细胞基因改变的比较研究和肿瘤细胞内某些酶活性的定量检测等。该技术的不足之处是使用手工操作的技术难度大；用LCM虽然操作简便，耗时少，取材准确，但需特殊的设备，激光器造价高。