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词条 随机引物PCR
释义

英文:arbitrarily primed PCR,AP-PCR

是指在对模板顺序一无所知的情况下,通过随意设计或选择一个非特异性引物,在PCR反应体系中,首先在不严格条件下使引物与模板DNA中许多序列通过错配而复性。在理论上,并不一定要求整个引物都与模板复性,而只要引物的一部分特别是3’端有3-4个以上碱基与模板互补复性,既可使引物延伸,一旦在两条单链上相距一定距离且有反向复性引物存在,则可在Taq DNA聚合酶的作用下进行DNA片段的扩增,经1至数轮不严格条件下的PCR循环后,再于严格条件下进行扩增。经DNA测序凝胶电泳分离后,即可得到DNA指纹图,通过对不同来源基因指纹图之间的比较,即可反映出待分析基因组的特征。

例如AP-PCR在mRNA差异显示中的运用,就是根据mRNA 3’端都有poly(A), 在poly(A)5’前1个碱基除A外有3种(5’…TAA…A 3’; 5’…GAA…A 3’; 5’…CAA…A3’)。通过选择一个与mRNA 3’端锚定引物(5’TT…TTG 3’) 在逆转录酶的作用下进行cDNA第一链扩增(反向转录),随后加入一个 cDNA 3’端的任意引物与T12M(M代表A、G或C)在低复性温度下进行第一个循环扩增。因此低复性温度下3’端任意引物随机地结合在cDNA第一链上,从而不同mRNA将得到不同大小的扩增产,经变性聚丙烯酰胺凝胶分离得到不同的指纹图谱。

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更新时间:2025/1/29 7:47:40