为确定三个连锁基因在染色体上的顺序和相对距离所作的一次杂交和一次测交。染色体上两连锁基因距离越远，在它们之间非姊妹染色单体互换的机会就越多，反之就越少，因此可用这两基因间的互换百分数（一般可用它们之间的重组百分数）的大小来表示它们之间距离的远近，而以1％的互换（或重组）定为一个图距，作为连锁基因的距离单位。

发现过程

简例

三点测交实验的意义

three-point testcross　三点测交

发现过程

基因位于染色体上，而且位置相近的基因是相互连锁的，不难想象基因在染色体上是直线排列的。

摩尔根的学生斯特蒂文特（Sturtevant）想出了一个巧妙的办法，那就是三点测交（three－point test cross）。从几何知识上知道，要证明a、b、c三点共线，可以通过三点之间的距离加以证明，当ab+bc=ac时三点在一条直线上。斯特蒂文特借鉴了这一思路，选择了六个性连锁基因进行果蝇的杂交实验，为了很好地说明问题现在我们以红眼V（Vermilion eyes）、翅无横脉Cv（crossveinless）和截翅Ct（cut, or snipped wing edges）三个基因为例，杂交及结果如下。

根据计算的结果，可以绘出V、Cv、Ct的遗传图。但是我们会发现V－Ct（13.2 m.u）和Ct－Cv（6.5 m.u）之和为19.7 m.u，大于V－Cv的距离（18.5 m.u），这是什么缘故呢？这是因为18.5 m.u这个数据是V－Cv的重组值，即从V和Cv这两个标记的重组中直接得来的，这两点中如果发生双交换的话，因不会产生重组而无法计算，易被漏掉，但从Cv－Ct和V－Cv的重组中可以看到确实发生了两次双交换，交换率为0.6 %×2=1.2%，如果把漏掉的双交换值加进去则

（V－Cv）=（Cv－Ct）+（V－Cv）

18.5 m.u+1.2 m.u=6.5 m.u+13.2 m.u=19.7 m.u

因此我们可用下面的公式来表示a－b之间的重组值和双交换的关系：

ab=ac+cb－2（ac）（cb）

ab是a和b两个基因之间的重组值。c是a与b之间的一个基因，ac、cb表示a和c、c和b的重组值，（ac）（cb）表示双交换值。

简例

例如，已知位于玉米一对同源染色体上的控制籽粒有关性状的有3对基因：C（有色）和c（无色），Sh（饱满）和sh（凹陷），WX（非糯）和wx（糯性）。用C，Sh，WX（有色，饱满，非糯）和c，sh，wx（无色，凹陷，糯性）杂交出F1。再用F1与三隐性（无色、凹陷、糯性）个体测交。若仍用c、sh和wx分别代表有关隐性基因，而用“+”代表各显性基因，则有关杂交、测交及测交一代结果如下：

由测交一代的表型可推知F1配子的基因型，由测交一代的亲本型和双互换型可推知sh基因位于其他两基因中间，所以有：

单互换Ⅰ（%）=[（98 + 107）+（39+ 19）]/6033

=4.36（%）

单互换Ⅱ（%）=[（672+662）+（39+19）]/6033

=23.07（%）

于是，这三个基因在染色体上的顺序和距离为：

三点测交实验的意义

（1） 比两点测交方便、准确。一次三点测交相当于3次两点测交实验所获得的结果；

（2） 能获得双交换的资料；

（3） 证实了基因在染色体上是直线排列的。

three-point testcross　三点测交

涉及到三个连锁基因的测交，可用来测定待测基因的顺序及相互之间的差距及双交换的频率和干涉。