简介

结果

结论

简介

HBV作为基因治疗载体的可能性及检验HBV点突变表达显性阴性突变体抗HBV的作用。方法在表达完整HBV颗粒的质粒上，经基因修饰后分别表达核心-P蛋白及核心-表面抗原的融合蛋白，整合于具有HBV复制的2．2．15细胞，形成细胞克隆，ELISA法检测细胞培养上清液中HBsAg和HBeAg，斑点杂交法检测细胞内HBV核壳中HBVDNA，PCR检测上清液中重组HBV颗粒。结果2．2．15-pMEP4组、2．2．15-CP组、2．2．15-CS组，对HBsAg平均抑制率分别为2．74%±3．83%．40．08%±2．05%(P<0．01)和52．94%±1．93%(P<0．01)；对HBeAg平均抑制率分别为4．46%±4．25%、52．86%±1．32%(P<0．01)和41．60%±1．65%(P<0．01)；对HBV复制的抑制率分别为15．3%、82．0%和67．2%。仅在2．2．15-CP组培养上清液中能检测出突变型HBV颗粒。结论在细胞内表达显性阴性突变体具有干扰HBV复制及抑制HBV抗原表达的作用；经修饰后的HBV基因组在野生型HBV辅助下．仍能包装并分泌完整的HBV样颗粒。

在表达完整HBV颗粒的质粒上，经基因修饰后分别表达两种类型显性阴性突变体，整合于具有HBV复制的2.2.15细胞，形成细胞克隆，ELISA法检测细胞培养上清液中HBsAg和HBeAg，斑点杂交法检测细胞内HBV核壳中HBVDNA，PCR检测上清液中重组HBV颗粒。

结果

2.2.15-pMEP4组、2.2.15-CP组、2.2.15-CS组，对HBsAg平均抑制率分别为2.74±3.83%、40.08±2.05%(P<0.01)和52.94±1.93%(P<0.01)；对HBeAg平均抑制率分别为4.46±4.25%、52.86±1.32%(P<0.01)和41.60±1.65%(P<0.01)；对HBV复制的抑制率分别为15.3%、82.0%和67.2%。仅有2.2.15-CP组培养上清液中能检测出突变型HBV颗粒。

结论

经过对HBV基因组的改造，在细胞内表达显性阴性突变体具有干扰HBV复制及抑制HBV抗原表达的作用；在2.2.15细胞中野生型HBV辅助下，仍能包装成完整的HBV样颗粒并分泌到细胞外，未来临床应用有望实现放大效应。