将体外培养物悬浮在加有冷冻保护剂的溶液中，以一定的冷冻速率降至零下某一温度，并在此温度下对其长期保存的过程。

按照冷冻保护液在冻结后是否形成冰晶来划分，冻存方法可分为非玻璃化和玻璃化冻存两种。

非玻璃化冻存是利用各种温级的冰箱分阶段降温至-70℃~-80℃，然后直接投入液氮进行保存；或者是利用电子计算机程控降温仪以及利用液氮的气、液，俺一定的降温速率从是问降至-100℃以下，再直接投入液氮的方法，以该种方法冻结的细胞悬液或多或少都有冰晶的形成。

玻璃化冻存则是指利用多种高浓度的冷冻保护剂联合形成的玻璃化冷冻保护液保护悬浮细胞，直接投入液氮进行冻存的方法，以该种方法冻结的细胞悬液没有冰晶的形成，但目前细胞冻存最常用的仍是前一种方法。