| 词条 | 异质性胞核核糖核蛋白 |
| 释义 | § 特点 异质性胞核核糖核蛋白（RA33／36）可以出现在疾病的起病阶段，所以有早期诊断价值。 § 检测 RA33/36抗原的制备及其抗体的检测：用Ehrlich腹水癌细胞提取的抗原检测抗RA 33/36抗体。简述如下，A型玻璃匀浆器破坏细胞膜，保存细胞核，750 g离心5 分钟，取沉淀，弃上清。加入4 ml核悬浮(10 mmol/L pH 7.9 HEPES-KOH缓冲液含有2.5 mmol/L MgCl 25%甘油)，搅拌30分钟，加入4 ml破核液(10 mmol/L pH 7.9 HEPES-KOH缓 冲液含有0.88 mmol/L NH4Cl)搅拌30分钟，50 000 g离心20分钟，取上清，弃沉淀 。上清液透析24～48小时，分装，－80 ℃冰箱保存。选用5%浓缩胶，12%分离胶电泳，样品 入浓缩胶前5 mA，进入浓缩胶后提高电流至10 mA，样品进入分离胶后改电流15 mA。电泳结束后，将抗原转印在硝酸纤维膜上。先后加血清、辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG抗体和 底物液显色。凡在蛋白质分子量为33 000和/或36 000区带出现条带者为阳性。 （1）RA患者：抗RA33/36抗体阳性率？。特异性43.5%？。 （2）正常人：健康成人为？。 （3）其他风湿病：阳性率？。 § 摘要 目的获得hnRNPA2/B1cDNA序列,研究其在滑膜组织中的表达水平,探讨它在类风湿滑膜炎中可能的致病作用。方法从人外周血单个核细胞中提取总RNA进行逆转录反应,经PCR扩增目的片段,将其克隆于PUC-T1质粒上,并经酶切电泳、DNA测序鉴定分析。采用免疫组化和原位杂交方法,分别利用单克隆抗体和特异的cDNA探针,检测滑膜组织中hnRNPA2/B1的含量及表达水平。结果从人外周血单个核细胞总RNA中扩增得到目的片段,并经测序证实该片段为hnRNPA2/B1的编码序列。免疫组化和原位杂交显示hnRNPA2/B1在类风湿关节炎(RA)滑膜中的表达水平整体上较骨关节炎(OA)和正常对照滑膜组高(P<0.05)。结论成功克隆hnRNPA2/B1cDNA;初步证明hnRNPA2/B1水平在RA关节局部增高,推测它可能参与了类风湿滑膜炎的发病。 |
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