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词条 全基因合成
释义

§ 基本介绍

A.已知序列的全基因的合成:

用RACE结合RT-PCR方法克隆已知序列的cDNA(全长),该方法比建立cDNA文库筛选cDNA的方法简便,由于直接从mRNA逆转录得到的cDNA扩增目的cDNA片段,避免了将cDNA克隆到载体,包装并转染细菌几个步骤引起的低丰度cDNA丢失,因此克隆得到的目的cDNA的可能性高于建立cDNA文库克隆目的cDNA的方法。该方法的第二个优点是得到的cDNA是含有完整5’端非翻译区的完整cDNA。

B.未知序列的全基因的合成:

RACE结合RT-PCR方法克隆未知序列基因的cDNA(全长)。根据已有的部分氨基酸序列,得到完整的cDNA序列。首先对其它物种该基因编码的氨基酸序列进行比较,找出保守区域;然后根据保守的氨基酸序列设计RACE用的3’简并引物,再用该引物进行RACE,得到5’端序列以后,用RT-PCR的方法扩增得到完整的cDNA片段。

§ 相关领域

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更新时间:2024/12/20 3:36:31