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词条 基因工程的基本操作程序
释义

目的基因的获取

从基因文库中获取

①基因文库:将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因,称为基因文库。

②基因文库的种类:1、基因组文库;2、部分基因文库。

利用PCR技术扩增目的基因

①PCR含义:是一项在生物体外复制特定DNA片段的核糖合成技术。

②PCR原理:DNA双链复制。

③前提条件:有一段已知目的基因的核苷酸序列,以便根据这一序列合成引物。

④扩增过程:目的基因DNA受热变性后解链为单链,引物与单链相应互补序列结合,在DNA聚合酶的作用下进行延伸,如此重复循环多次。

⑤结果:每次循环后的目的基因的量增加一倍,即成指数形式扩增。

人工合成法

如果基因较小,核苷酸序列又已知,可以通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成。

基因表达载体的构建

组成

1、目的基因;2、启动子;3、终止子;4、标记基因。

功能

1、使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代;2、使目的基因能够表达和发挥作用。

将目的基因导入受体细胞

转化

目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。

导入植物细胞

方法:农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法

导入动物细胞

方法:显微注射技术

常用受体细胞:受精卵

导入微生物细胞

用钙离子处理细胞,使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态,这种细胞称为感受态细胞。

目的基因的检测与鉴定

DNA分子杂交技术(检测目的基因、 分子杂交技术(检测mRNA)、 抗原抗体杂交技术(检测蛋白质)

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更新时间:2025/2/25 11:07:16