词条 | 基因工程的基本操作程序 |
释义 | 目的基因的获取从基因文库中获取①基因文库:将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因,称为基因文库。 ②基因文库的种类:1、基因组文库;2、部分基因文库。 利用PCR技术扩增目的基因①PCR含义:是一项在生物体外复制特定DNA片段的核糖合成技术。 ②PCR原理:DNA双链复制。 ③前提条件:有一段已知目的基因的核苷酸序列,以便根据这一序列合成引物。 ④扩增过程:目的基因DNA受热变性后解链为单链,引物与单链相应互补序列结合,在DNA聚合酶的作用下进行延伸,如此重复循环多次。 ⑤结果:每次循环后的目的基因的量增加一倍,即成指数形式扩增。 人工合成法如果基因较小,核苷酸序列又已知,可以通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成。 基因表达载体的构建组成1、目的基因;2、启动子;3、终止子;4、标记基因。 功能1、使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代;2、使目的基因能够表达和发挥作用。 将目的基因导入受体细胞转化目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 导入植物细胞方法:农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法 导入动物细胞方法:显微注射技术 常用受体细胞:受精卵 导入微生物细胞用钙离子处理细胞,使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态,这种细胞称为感受态细胞。 目的基因的检测与鉴定DNA分子杂交技术(检测目的基因、 分子杂交技术(检测mRNA)、 抗原抗体杂交技术(检测蛋白质) |
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