一、细菌计数板用概念

二、细菌计数板和血球计数板的区别

三、细菌计数板的使用方法

四、细菌计数板加样

一、细菌计数板用概念

测定微生物细胞数量的方法很多，通常采用的有显微直接计数法和平板计数法。显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质，常不易分辨。菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽（petrofhausser）细菌计数板。

二、细菌计数板和血球计数板的区别

两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看清。血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区，计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。计数区边长为1mm，则计数区的面积为l mm2，每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。已知：1mm3体积=10 mm×10 mm×10 mm= 1000mm3所以：1mm3体积应含有小方格数为1000mm3/1/4000mm3=4×106个小方格，即系数k=4×106。因此：每ml菌悬液中含有细胞数= 每个小格中细胞平均数（n）×系数（k）×菌液稀释倍数（d）5．计数时若计数区是由16个大方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个大方格（即100小格）的菌数。如果是25个大方格组成的计数区，除数上述四个大方格外，还需数中央l个大方格的菌数（即80个小格）。如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。6．对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。每个样品重复计数2—3次（每次数值不应相差过大，否则应重新操作），求出每一个小格中细胞平均数（n），按公式计算出每ml（g）菌悬液所含酵母菌细胞数量。7．测数完毕，取下盖玻片，用水将血球计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放入盒内保存。

三、细菌计数板的使用方法

1、准备

准备计数时，磨光的表面小心地用擦镜纸擦干净。盖玻片也要擦干净。

2、盖上盖玻片

在需要盖的周边区域需要用蒸馏水弄的微湿然后盖玻片要慢慢的从计数板的前端推入，直到盖玻片的前端边缘与计数板的划格子的区域处于同位。

3、注意：盖玻片是很容易坏掉的！

在外部支持和盖玻片之间的干扰线（牛顿环）的组成显示了盖玻片的准确位置。

四、细菌计数板加样

1、取一个良好混合型的吸管并且放置一些初期的几滴液体。把吸管的外部擦干然后保持吸管一定的角度直到小滴液体被吸管尖端吸上去。然后这滴液体被放置在盖玻片和计数板之间。由于盖玻片和计数板之间的毛细管现象作用的结果，两个平面之间的缝隙被灌满。在溶液要满出击数板截面的边缘之前，马上移走吸管的尖端。如果有可见气泡或者液体已经满出边缘并且进入其他的沟里，那么计数板就要擦干净并且重新加样。

2、计数，装载好的计数板被放置在显微镜台上然后计数格在低倍镜焦距中显示。高倍物镜要非常小心的操作，因为计数板比常规的要更厚。如果你不小心的话，会导致计数板或者物镜镜头的损伤。

3、如果可能的话，在作血细胞计数的时候使用机械平台的显微镜。显微镜的照明是重要的，太亮了会影响划格线的观察。光可以通过虹膜光圈减弱直到划得格子在背景中再次清晰可见。细胞/质粒的计数应该充分稀释到他们不再互相重叠，并且均匀的分配。要完成计数检测需要扩大到期望的可见的细胞/质粒。细胞数量的计算推荐计数100方格作为排除少量的结果。计数格在超过划线区域使用时需要均匀的分配，并且这个通过藉由三倍之数决定的方格支架在进入区段之内。

4、计数完100方格后总数除100（计数的方格数），来得到每格的平均值。乘稀释度，除1/4000（每个小方格的立方容积1/20 x 1/20 x 1/10 – 1/4000mm3）。这次计算得到的数字是原非稀释流质的每立方毫米的细胞数量。