概述

详细介绍

结论

概述

提纯免疫球蛋白的方法很多，常见的有离子交换法、凝胶过滤法和亲和层析法等。离子交换法是根据分子电荷密度来分离纯化免疫球蛋白，常用DEAE-cellulose和DEAE-Sephadex柱。蛋白质在溶液离子强度较低时可与离子交换介质中带相反电荷的极性基团结合，当pH或离子强度改变时，又可被同电性的离子竞争置换解脱。离子交换层析就是根据电荷性的差异进行分子的分离，它使带电荷的蛋白质结合在带异种电荷的基质上，通过改变洗脱液的盐浓度或pH值来改变蛋白质与基质之间的结合程度，结果使不同类的蛋白质被分别洗脱下来。离子交换层析是一种成熟的技术，它的重现性好，简单易行，具有分辨率高、容量大、收获率高的优点，而且具有浓缩效应，通常作为多步层析中的第一步（李长彪等，2005）。不同的抗体具有不同的等电点，即使是同一亚类的免疫球蛋白也会有相当大的差异，因此，并没有一个通用的程序进行离子交换层析。

详细介绍

凝胶过滤法是基于免疫球蛋白相对分子质量大于其它蛋白质来分离的，SephadexG100-200。凝胶过滤是一种温和的纯化方法，对样品分子的活性没有影响，它是根据样品中物质分子大小不同，在通过多孔凝胶介质时达到分离目的。分子小的能进胶，路程长，后流出；分子大的不能进胶，路程短，先流出。对IgG类的抗体来说，凝胶过滤常用来去除电荷性与单克隆抗体相同的杂质，如转铁蛋白等。凝胶过滤可以用来去除去纯化材料的双体、四聚体和多聚体，也可以用于纯化方案的最后一步，用于最终产品储存前的脱盐缓冲转换。不同凝胶介质的分离范围是不同的，应选择分离抗体分子大小范围内的相应凝胶介质。另外，粗颗粒的凝胶介质速度快，细颗粒的凝胶介质分辨率高。凝胶过滤对层析柱有要求，理想的层析柱的直径与长度之比是1：25～100（齐顺章，1986）。当用同样直径的层析柱分离2种以上的物质时，长层析柱比短的分辨率高；当用同样长度的层析柱分离2种以上的物质时，长层析柱比短的分辨率高；当用同样长度的层析柱分离2种以上的物质时，层析柱直径大的比小的分辨率高。

结论

亲和层析法是依生物高分子所特有的生物活性进行分离，提纯和浓缩的特异性吸附层析技术，是一种有效的分离方法，常用琼脂糖亲和层析法。亲和层析具有高效、快速、纯化结果好的优点，但它有以下几个缺点：需要高纯度的亲和偶联配体；洗脱液可能损害目的蛋白活性，配体可能从柱子上脱落下来；成本高费用大（张龙翔等，1982）。常用的配体有3类：A蛋白、G蛋白、抗原或特异性抗单克隆体。