简介

一、血清酶的来源和分类：

二、血清酶的命名：

三、血清酶的去路：

四、酶的活性单位及生理差异：

五、疾病时血清酶改变的机制：

方法学介绍

简介

对心肌酶检查，检查心肌酶主要是确定心肌缺血坏死或细胞膜通透性。

1.血清酶总论：P232

LDH、AST、CK及其同I酶，α－HBD

一、血清酶的来源和分类：

（一）根据来源及血浆中发挥作用：

1.血浆持异酶：主要在血浆中发挥催化作用的酶类

eg：凝血酶原，凝血因子（X、ⅫI、Ⅶ）纤溶酶原，前激肽释放酶

假性胆碱脂酶：铜蓝蛋白，脂蛋白脂肪酶，肾素

假性胆碱脂酶：水解可能干扰乙酰胆碱脂酶活性的一些化合物

铜蓝蛋白：是一种氧化酶，与Fe蛋白，动员有关

脂蛋白脂肪酶：参与脂蛋白中脂肪的水解和储存

2.外分泌酶

eg：唾液和胰淀粉酶，胰脂肪酶，胃蛋白酶，胰蛋白酶和前列腺酸性磷酸酶等。

在血浆中很少发挥催化作用

其浓度与其分泌腺体的功能有关

3.细胞酶：存在于各细胞和组织中进行物质代谢的酶类

在血液中无重要的催化作用

（1）一般代谢酶：无器官特异性

（2）组织专一性酶：OCT、SDH、ADH主要存在于肝。其活性能较特异地反映肝cell的病变。

（二）根据酶促反应性质可将酶分为六类：

1.氧化还原酶类：催化底物进行氧化还原反应。eg:LDH

CHO CHO

C=0＋NADH＋H+ LDH CH－OH＋NAD+

COOH COOH

丙酮酸 乳酸

eg：LDH琥珀酸脱氢酶，细胞色素氧化酶，过氧化物酶

2.转移酶类：催化底物之间进行某些基团的转移或交换的酶类

COOH CH3 COOH CH3

（CH2）2 ＋HC－NH2 ALT （CH2）2 ＋ C＝0

C＝0 COOH HC－NH2 COOH

COOH　COOH

α-酮戊二酸 丙氨酸 谷氨酸 丙酮酸

eg：转氨酶、已糖激酶、磷酸化酶

3.水解酶：催化底物之间发生水解反应的酶类

eg：淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、磷酸酶

ALP

对－硝基苯酚磷酸盐<IMG height=10 src="http://www.clinet.com.cn/images/image005.gif" width=50 v:shapes="_x0000_s1026">对－硝基苯酚＋磷酸盐

水解

4.裂解酶类：催化底物移去一个基因而留下双键的反应或逆反应的酶类。

eg：碳酸酐酶，醛缩酶

5.异构酶类：催化各种同分异构体之间互相转化的酶类

eg：磷酸已糖激酶，消旋酶

磷酸已糖激酶

6－磷酸葡萄糖<IMG height=10 src="http://www.clinet.com.cn/images/image005.gif" width=50 v:shapes="_x0000_s1026">6－磷酸果糖

6.合成酶类（连接酶类）：催化两分子底物合成－分子的化合物，同时必须偶联有ATP磷酸键断裂。

二、血清酶的命名：

1.习惯命名法：根据酶来源，催化反应性质及底物来命名。

底物：淀粉酶，蛋白酶

性质：脱氢酶、转移酶

来源：胰淀粉酶、胃蛋白酶

底物＋性质：谷草转氨酶

2.系统命名法：酶反应底物、性质均要列出，各底物间以“：”隔开

编号：（1）1为氧化还原酶类

2为转移酶类

3为水解酶类

4为裂解酶

（2）反应作用的位置，即可用于哪个基因

1.1 －CH－OH

1.2 －C＝0

1.3 －C＝CH

1.4 －C＝NH

1.5 －CH－NH2

1.6 NADH、NADPH

（3）

1.1.1 氯化还原酶 CH－OH 受体：NAD+ NADP-

1.1.2 氯化还原酶 CH－OH 受体：细胞色素

1.1.3 氯化还原酶 CH－OH 受体：分子氧

三、血清酶的去路：

（一）血清酶的排泄：P234

1.尿路：是血清中低分子量酶类主要去路

2.胆汁不是血清酶排泄途径

（二）肝或网状内皮系统对血清酶的清除：

肝脏对以酶原形式存在的酶类有消除作用

（三）酶蛋白在血管内的失活和分解：

（四）转入其它体液

四、酶的活性单位及生理差异：

（一）酶的活性单位：在规定条件，每分钟催化1umol的基质发生转化所需要的酶量。

规定条件包括：温度、PH、缓冲系统、基质浓度及辅助因素

（二）酶的单位计算

1.根据标准计算：

（U/L）酶活力单位＝A样品/A标准×C标准×Vt/Vs×1/t×1000

总体积-样品+基质

2.根据反应底物的消光系数：

酶活力＝A样品/ξd×Vt/Vs×1/t×1000

消光系数 比色杯厚度

（三）血清酶的生理差异：

1.性别：男＞女

2.年龄：儿童 磷酸酶＞成人 婴儿 LDH 2倍成人

3.进食：对酶活力本身无影响，但可影响比色时的浊度

4.活动：

5.妊娠：ALT、LDH、ALP↑

五、疾病时血清酶改变的机制：

（一）合成异常：P238

1.合成减少

2.合成增加

（二）酶从损伤细胞中释放增加：

是疾病时大多数血清酶↑的主要机制

（三）其它机制：

肾衰→尿少→ 血淀粉酶↑

药物，毒物可作为酶的抑制剂

2.AST的测定：

AST 谷草转氨酶（GOT）

天门冬氨酸氨基移换酶

一、AST分布：

广泛分布于人体各组织、器官中，主要在心、肝、骨骼肌、肾、胰、脾、肺、RBC中。其中以心肌cell含量最丰富。

主要存在线粒体中（M－AST）。胞浆中（C－AST）仅占12%，是可溶性的正常血清中AST很少，只有上述组织发生病变

时，才释放入血。

方法学介绍

（一）赖氏比色法：＜实验＞P115　1.原理：

COOH COOH COOH COOH

（CH2）2 ＋ CH2 AST （CH2）2 ＋ CH2

C＝O HC-NH2 37℃ HC－NH2 C＝0

COOH COOH COOH COOH

酮戊二酸 天门冬氨酸 谷氨酸 草酰乙酸

COOH CH3

CH2 柠檬酸苯胺 C＝0＋CO2

C＝0 脱羧 COOH

COOH

丙酮酸

CH3

C＝0 ＋ →丙酮酸－2.4－ ＝ ＋H2O

COOH 硝基苯腙

2.4－二硝基苯肼 酸性，草黄色，加碱，棕红色

与标准浓度丙酮酸生成的苯腙比色（505nm）

2.正常参考值：8-28u

3.注意事项

（1）溶血标本不能用于AST测定，因为RBC中AST是血清10倍。

（2）M－AST、C－AST理化性质，Ag性均不同，由不同基因控制，但催化相同反应，是同I酶

（3）赖氏比色法简易性，相对准确性，所以是普及的原因

（4）难以确定在酶反应期内，产物的生成与时间成正比。

草酰乙酸是AST竞争抑制剂，随反应进程，产物，酶反应不断。

（5）显色反应及底物浓度问题。

酮戊二酸也可与2.4－二硝基苯肼反应，产生另一棕色苯腙，使AST测定假阳性增高。

为了减少其干扰，波长选在490-530nm，此时丙酮酸为－酮戊二酸2倍

2.4－二硝基苯肼在碱性溶液中也可呈色，使吸光度伪性增高。

（6）A、偶联转氨作用：

ALT

丙酮酸＋谷氨酸<IMG height=10 src="http://www.clinet.com.cn/images/image005.gif" width=50 v:shapes="_x0000_s1026">丙氨酸

所以肝疾病AST、ALT同时，使丙酮酸消耗，AST测定结果减低。

B、产物旁路

乳酸

LDH ↑NADH＋H+

丙酮酸

↑

α-酮戊二酸＋天门冬aa AST 草酰乙酸＋谷aa.

↓MDH＋NADH＋H+

苹果酸

所以受LDH、MDH干扰，使AST测定结果减低

（二）酶偶联一些外连续监测法：

1.原理：L－天门冬aa.＋α-酮戊二酸 AST 草酰乙酸＋谷aa.

草酰乙酸＋NADH＋H+ MDH L－苹果酸＋NAD+

340nm

吸光度下降值，计算AST活力

2.参考值：男＜40u/L 37℃

女＜35u/L 37℃

3.注意事项：

（1）采血后立即分离血清，避血溶血

血清与血块不可长时间设置在一起

（2）血清，室温4-8h，2-6℃ 7d -20℃ 8月 活力不变

（3）抗凝剂血浆：

EDTA、2Na，肝素对AST无抑制作用

不能用草酸盐抗凝剂，因为可抑制AST活性

（4）AST浓度过高，稀释重做。

（5）不存在偶联转氨作用和产物旁路问题

（6）不存在 酮戊二酸干扰，可适当提高底物浓度使反应完全

（7）底物中存在谷氨酸脱氢酶（GLDH）

α-酮戊二酸＋NADH＋H+＋NH3 GLDH 谷aa.＋NAD+＋H2O

消耗NADH＋H+，使结果伪性增高。

（8）轿清中丙酮酸LDH

丙酮酸＋NADH＋H+ LDH 乳酸＋HAD+

消耗NDAH＋H+，使结果偏高

（9）在指示酶作用有，草酰乙酸可自动脱羧生成丙酮酸，使结果偏低。应加LDH，使之成为乳酸，从而更加准

确反映AST活力。

所以MDH、LDH共同作为指示酶

三、临床意义：

1.AST在心肌中含量最多，所以在急性心梗时6-12h↑，48h达高峰，3-5d恢复正常

2.急性肝炎，手术后，药物中毒，AST明显↑

肝Ca、慢性肝病，心肌炎，AST中度

肌炎，胸膜炎，肾炎，AST轻度

3.急性肝炎，AST，ALT同时↑，可达正常值10-30倍，黄疸前期就已↑，有助于临床早期诊断。

3.AST同I 酶：

<黄>血清酶测定时诊断心梗的意义：

心肌C、肝C出现实质性损害　M－AST　C－AST↑

M－AST↑对肝病预后有一定诊断意义

心梗M－AST↑　所以M－AST越↑，心梗并发心衰的发病率、死亡率越↑，尤其推测死亡率方面意义更大。

4.血清乳酸脱氢酶的测定：　原理　PH对其影响

LDH　糖酵解酶，氧化还原反应

有五种同I酶LDH1－LDH5

一、LDH分布和特点：

广泛分布，主要在肾，其次心，骨骼肌，其它肝、脾、胰、肺，上述组织病变，血清中LDH。主要催化以下反应：

L－乳酸＋NAD＋　丙酮酸＋NADH＋H+

PH碱　正反应（L－P）

PH中性　逆反应（P－L）

二、方法学

（一）比色法：＜实验＞P122

1.原理：L－乳酸＋NAD＋　LDH　丙酮酸＋NADH＋H+

PH8.8

丙酮酸＋2.4－二硝基苯肼　→　丙酮酸－2.4－二硝基苯腙

酸 草黄色

加NaOH　棕红色

颜色越深，酶活力越大

2.参考值：225-540u/dL

3.注意事项：产物生成量与反应时间不成比例

（1）标本严禁溶血　因为RBC内LDH活力是血清内的100倍。

（2）LDH受重金属盐、EDTA、草酸盐的抑制。最好用血清标本

（3）血清标本2-6　数天，室温48h

（4）准确性和重复性在酶学检验中最差，因为五种同I酶与底物结合能力不同，最适反应条件不同，在病理

LDH组成差异大，所以很难找出LDH最适反应条件。eg：心梗LDH1↑，肝病LDH5↑

（5）结果＞2500u/dL，将标本稀释重做。

（二）连续监测法（酶法）：＜实验＞P120

1.原理：L－乳酸＋NAD＋　PH8.8-9.8　丙酮酸＋NADH＋H+

逆反应比正反应速度快2-3倍　所以反应偏向左侧，多用P－L

LDH

丙酸酸＋NADH＋H+<IMG height=10 src="http://www.clinet.com.cn/images/image005.gif" width=50 v:shapes="_x0000_s1026">乳酸＋NAD+

PH7.4

340nm处监测，吸光度下降幅度与LDH成正比。

2.参考值：240-460u/L 37℃

3.注意事项：

（1）逆反应优点：

a.试剂用量少，所需NAD+，只是L－P所用NADH＋H+的3％，样品少

b.单位时间内吸光度变化大，逆反应线性范围较大，酶促反应速率比正反应快3倍，利于测定。　时间短

c.酶活力随时间的线性关系较长

（2）正反应优点：

a.NADH＋H+比NAD+稳定，价格低，易得到纯品。

底物L－乳酸与逆反应底物丙酮酸稳定

b.L－乳酸对LDH的抑制低于丙酮酸对LDH的抑制

（3）连续监测法可利用正、逆反应，优于比色法。

（4）金属离子的存在可以降低NAD+稳定性

试剂中可加入EDTA，使EDTA络合金属离子，增加NAD+稳定。

（5）NAD+不稳定，产生对LDH有抑制作用的物质。在碱性液中比在酸性液中稳定，在Tris缓冲液中比在磷酸

盐缓冲液中稳定。

（6）某些批号的NADH＋H+还有LDH的物质，使用前检查NADH＋H+质量，NADH＋H+溶于Tris缓冲液，分别在

260nm和340nm测吸光度，应＜2.3，若＞2.3，说明含有在260nm处有吸收峰的杂质，如NAD+、腺苷。

（7）α－酮丁酸，羟基丙酮酸、乙醛酸可代替丙酮酸作底物。

（8）标本不能溶血

三、临床意义：

1.LDH↑：急性心梗、骨骼肌损伤、某些肝炎、白血病、肝硬化、阻塞性黄疸及恶性肿瘤。

2.心梗：12-24h，LDH↑，48-72h达高峰，1-2W后恢复正常

3.恶性肿瘤晚期LDH，恶性肿瘤引起的胸腹水中LDH↑

4.慢性肾小球肾炎、SLE、糖尿病肾病等病人中，尿LDH可达正常人3-6倍，尿中含多种抑制LDH活性物质，如尿素，

小分子肽类。

低PH值也可抑制LDH活性。

5.尿毒症患者LDH正常，透析后LDH↑，因为体内尿素较高