词条 | 生物印迹 |
释义 | 生物印迹(bio.imprint)是一种通过酶与配体问的相互作用、诱导,从而改变酶的构象的方法,其原理是利用酶在水溶液中的柔性,加人手性竞争性抑制剂,然后将这种酶一抑制剂复合物转入亲脂性溶剂,使酶的三维结构以一种改性的状态被“冻结”,除去抑制剂的改性酶凭借其“记忆”功能就具有了对底物的立体选择性。 Russel等【35】提出的生物印迹的过程被广泛地接受与应用。其过程如下:(1)将酶溶于含有其配体的缓冲溶液中,这一步使酶的构象被诱导而发生变化;(2)将此酶液冷冻干燥形成酶粉,水分不经融化直接升华,可以固定酶的构象;(3)用有机溶剂冲洗冻干的酶粉,除去印迹分子,即洗脱过程;(4)将有机溶剂冲洗过的酶粉过滤并真空干燥。为了防止冻干过程中酶的构象可能发生的变化,必须在此过程中加入可以维持酶结构的保护剂(如无机盐、底物类似物等),来减轻甚至消除这种影响。 |
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