发展简史

现状与展望

发展简史

免疫荧光组织化学是现代生物学和医学中广泛应用的技术之一，是由Coons和他的同事(1941)建立，免疫荧光技术与形态学技术相结合发展成免疫荧光细胞（或组织）化学。它与葡萄球菌A蛋白（SPA）、生物素与卵白素、植物血凝素（ConA等）相结合拓宽了领域；与激光技术、电子计算机，扫描电视和双光子显微镜等技术结合发展为定量免疫荧光组织化学技术；荧光激活细胞分类器Fluorescin activated cell sorter（FACS）的应用，激光共聚焦显微镜的问世，使免疫荧光细胞技术发展到更高的阶段，开创了免疫荧光技术的新领域。细胞显微分光光度计与图像分析仪的结合使免疫荧光组织化学的定量检测更加准确。80年代到90年代相继又有新的荧光素出现如R-藻红朊、B-藻红朊、C-藻青蛋白、cy2、cy3、cy5和cy7等均在流式细胞仪和激光共聚焦显微镜中广泛应用。

由于免疫荧光组织化学的特异性，快速性和在细胞水平定位的准确性，已在免疫学、微生物学、病理学、肿瘤学以及临床检验等许多方面得到广泛应用，日益发挥重要作用。

现状与展望

免疫荧光组织化学技术经过半个多世纪的不断改进和创新，已成为现代研究生物和医学的重要手段之一。由于免疫荧光技术与形态、机能相结合不断完善和发展，尤其是合成了多种新荧光素与抗体容易结合，且结合物稳定。可以和FITC结合进行免疫荧光组织化学双标记或三标记。至今，它已和亲合化学技术如SPA、Biotin以及avidin、ConA相结合，应用领域也日益扩大，又与现代的电子计算机、扫描电镜技术、共聚焦显微镜、荧光激活细胞分类器（FACS）以及数码相机摄影技术的应用，使得快速性、简便性有了更大的提高，使得定量更加准确。90年代又开展了荧光原位末端标记和荧光原位杂交技术，使得应用范围更广。

虽然免疫组织化学技术有了很大的发展，如免疫金银法、免疫胶体金法、SP、Evision二步法和CSA法，但由于它有自己独特的优点：特异性强，定位准确、简便、快速、鲜明，在许多领域中仍占有不可取代的地位。如肾活检、皮肤活检中IgG、IgM、IgA、C3等检测，自身抗体的检测，传染病的快速诊断，单克隆抗体的筛选及鉴定等。随着科学技术地不断发展，免疫荧光组织化学技术已经广泛应用于生命科学的各个领域，放射出更加五彩缤纷的荧光。

参考文献

（1）Akivoshi Kawamura, JR. Fluorescent antibody techniques and their application. University of Tokyo Press. 1969.

（2）王伯沄. 免疫荧光组织化学和荧光组织化学技术. 第四军医大学科技资料增刊, 1974; 2: 5-30.

（3）Huang SN. Application of immunofluorescent staining on paraffin section improved by trypsin digestion. Lab Invest, 1976; 35: 383.

（4）Wick G, Traill KN, Schouesten K. Immunofluorescence Technology, Selected Theoretical and Clinical Aspects. Elseries Biomedical press. Amsterdom, 1982: P27~36, P181, P229~262,P317~323.

（5）Akiyoshi Kawamura Jr. Fluorescent antibody Technique and Their Applications. Second Edition University of Tokyo Press, Tokyo, 1977; 79: P141~281.

（6）蔡文琴, 王伯沄主编. 实用免疫细胞化学. 成都：四川科技出版社 1990，P968-977.

（7）李成文. 现代免疫化学技术. 上海: 上海科技出版社 1992；P97-100.

（8）Mahmudi-A3er-s, Lacy-P, Bablit2-B, Mogbel-R. Inhibition of nonspecific binding of fluorescent- labelled antibodies to human eosinophils. J Immunol-Methods. 1998; 227(1-2): 113-119.

（9）Magro-C-M, Cronison-AN. The immunofluorescent profile of dermatomyositis: a comparative study with lupus erythermatosus. J Cutan Pathol. 1997; 24(9): 543-552.

（10）Bausch-SB. A method for triple fluorescence labeling with vicia villosa agglutinin, an anti-parvalubumin antibody and an anti-G-Protein-coupled receptor antibody. Brain Res Brain Prtoc. 1998; 2(4): 286-298.

（11）Gregoni Weber, Jameson-DM. 1916-1917 A fluorescent life time. Biophys J. 1998; 75 (1): 419-422.

（12）Savige JA, Paspalians B, Silvestrini R, et al. A review of immunofluorescent patterns associated with antineutrophil cytoplasmic antibodies (ANCA) and their differentiation from other antibodies. J Clin Pathol. 1998; 51(18): 568-571.

（13）Ballou B, Fisher GW, Deng JS, et al. Cyanine fluorochenome-labeded antibodies in vivo: assessment of tumor imaging using Cy3, Cy5, Cy5.5 and Cy7. Cancer Detect Prev. 1998; 22 (3): 251-257.

（14）Gruber HJ, Hahn CD, Kada G, et al. A anomalous floworescence enhancement of Cy3 and Cy3.5 versus anomalous fluorescemce loss of Cy5 and Cy7 upon covalent linking to IgG and noncovalent binding to avidin. Bioconjug Chem. 2000; 11(5): 696-704.

（15）Southweel BR, Fumess JB. Immunohistochemical demonstration of the NKCD tachykin in receptor on muscle and epithelia in guinea pig intestine. 2001; 120(5): 1140-1151.

（16）Arseniev L, Pickerd N, Goudeva L, et al. Compasative evaluation of commonly used clone and fluorochrome conjugates of monoclonal antibodies for CD34 antigen detection. J Hematother Stem Cell Res. 1999; 8(5): 547-559.

（17）O'Brjen TE, Metheney CD, Polansky JR. Immunoflnorescence method for quantity the trabecular meshwork qlncocorticoid responsee (TIGR) protein in trabecular meshwork and schlemm's canal cells. Curr Eye Res. 1999; 19(6): 517.

（18）Huang MC, Kabo O, Tajika Y, et al. Detection of mammosomatotrophs in paraffin embed allowfullscreen='true'ded specimens of various pituitary adenomas. Chung Hua Hsssueh Tsa Chih (Taipei). 1999; 62(12): 845-851.

（19）王伯沄, 李玉松, 黄高升, 张远强主编. 病理学技术. 北京: 人民卫生出版社出版; 2000年6月 P380-396.